MINAMBIENTE - Resolución 1406 de 2024

RESOLUCIÓN NÚMERO 4 | 6 pe)1 OCT 2024 “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursosgenéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad de Medellinbajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6° de la Ley1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”. LA DIRECTORA DE BOSQUES, BIODIVERSIDAD Y SERVICIOSECOSISTEMICOS En ejercicio de sus facultades legales y especialmente las conferidas en elnumeral 14, del artículo 16 del Decreto Ley 3570 de 2011 y la Resolución 1756de 2022, y

CONSIDERANDO: ANTECEDENTES Que mediante radicado No. 43505 del 31 de diciembre de 2020, la Universidadde Medellín, identificada con NIT, No. 890902920-1, solicitó a la Dirección deBosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente yDesarrollo Sostenible un contrato de acceso a recursos genéticos y sus productosderivados, bajo las disposiciones del Artículo 6% de la ley 1955 de 2019, paraamparar y autorizar las actividades de acceso a recursos genéticos y susproductos derivados y de recolección de material biológico desarrolladas enejecución del proyecto de investigación denominado: “Programa deBioprospección: Uso de microalgas para la obtención de nuevas fuentes dealimento y energía”.

Que la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos delMinisterio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, mediante radicado No. 2103-2-43505 del 12 de abril de 2021, requirió a la Universidad de Medellín para queaclarara y aportara información adicional respecto a su solicitud.

Que mediante radicado No. E1-2021-17827 del 26 de mayo de 2021, laUniversidad de Medellín dio respuesta a los requerimientos realizados por laDirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio deAmbiente y Desarrollo Sostenible. Que la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos delMinisterio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, mediante radicado No. 2103-2-2620 del 31 de agosto de 2021, requirió a la Universidad de Medellín para queaclarara y aportara información adicional respecto a su solicitud. Que mediante radicado No. 2103-2-2620 del 14 de enero de 2022, laUniversidad de Medellín dio respuesta a los requerimientos realizados por laDirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio deAmbiente y Desarrollo Sostenible. Que la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos delMinisterio de Ambiente y Desarrollo Sostenible emitió Auto No. 016 del 2 demarzo de 2022 con el cual, se admitió la solicitud de Contrato de Acceso aRecursos Genéticos y sus Productos Derivados presentada por la Universidad deMedellín para amparar autorizar las actividades de acceso a recursos genéticos “;; Página 1 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024“Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos el artículo 6° de ia Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”.

y sus productos derivados llevadas a cabo en desarrollo del proyecto deinvestigación denominado: “Programa de Bioprospección: Uso de microalgaspara la obtención de nuevas fuentes de alimento y energía”, en los términos delartículo 6% de la Ley 1955 de 2019. Que en el Auto No. 016 de 2022, la Dirección de Bosques, Biodiversidad yServicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenibleordenó a la Universidad de Medellín realizar la publicación de un extracto de lasolicitud dentro de los cinco (5) días hábiles siguientes a la notificación del acto. Que la Universidad de Medellín, dando cumplimiento a lo ordenado en Auto No.016 de 2022 realizó la correspondiente publicación en la página web de laUniversidad y remitió constancia mediante radicado No. E1-2022-08131 del 8de marzo de 2022. Que la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos delMinisterio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, mediante radicado No. 2103-E2-2022-02404 del 09 de abril de 2022, requirió a la Universidad de Medellín paraque aclarara la información referente a las actividades de recolección y elpronunciamiento de Ministerio del Interior. Que mediante radicado No. 2022E1028089 10 agosto 2022, la Universidad deMedellín dio respuesta parcial a los requerimientos realizados por la Dirección deBosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente yDesarrollo Sostenible. Que la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos delMinisterio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, mediante radicado No.21032022E2009347del 6 de octubre 2022, requirió a la Universidad de Medellínpara que aclarara la información referente a las actividades de recolección.

Que una vez realizados los análisis de los requerimientos formulados, laDirección de Bosques Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio deAmbiente y Desarrollo Sostenible decidió dar continuidad al trámite, teniendo encuenta que el certificado de consulta previa dei ministerio del interior indicó quepara las actividades y características que comprenden el proyecto titulado:“programa de bioprospección: uso de microalgas para la obtención de nuevasfuentes de alimento y energía”, que se localizará en la jurisdicción de losmunicipios de Medellín, Guatapé y en el corregimiento Santa Elena del municipiode Medellín en el departamento de Antioquia no requieren consulta previa. Que en cumplimiento de lo previsto en el artículo 29 de la Decisión Andina 391de 1996 de la Comisión del Acuerdo de Cartagena y las competencias asignadaspor el Decreto 3570 de 2011 a la Dirección de Bosques, Biodiversidad y ServiciosEcosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, se emitióDictamen Técnico Legal No. 364 del 1 de octubre de 2024, mediante el cual setuvieron en cuenta las siguientes consideraciones:

1. ANÁLISIS DE LOS ASPECTOS TÉCNICOS DE LA SOLICITUD DE ACCESO 1.1. Justificación La evaluación intencional de material biológico silvestre en la búsqueda de nuevosproductos valiosos y la aplicación tanto de técnicas tradicionales como de tecnologíasavanzadas para desarrollar nuevos productos (Artuso, 2002) ha sido para los países envía de desarrollo una gran oportunidad en el tema de bioprospección ya que cuentan con

derivados, presentada por la Universidad de Medellin bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en Página 2 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024406 o “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productosderivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”. la biodiversidad necesaria para su desarrollo, no sólo en términos económicos yproductivos, sino también para conocer y conservar las especies nativas. Desde el punto de vista de las microalgas, estas se convierten en uno de los organismosde mayor interés para la biotecnología, ya que constituyen un grupo diverso de especiesy que por su característica fotosintetizadora resultan útiles en la producción desustancias de interés ambiental, químico, medico e industrial. La bioprospección deespecies de microalgas es importante para seleccionar la mejor cepa con el fin deproducir grandes cantidades de metabolitos y participar en diversos procesos biológicos(Araujo, Matos, Goncalves, Fernandez, & Farias, 2011).

Microalgas en la acuicultura Una de las principales aplicaciones de las microalgas es la alimentación piscícola por sucomposición, economía y potencial ecológico (Agrocadenas, 2005) (Torrentera-Blanco &Tacon, 1989). La piscicultura en Colombia y América Latina ha tenido gran crecimientoen los últimos años (16% anual, según el ministerio de agricultura), pero tiene aúnalgunas dificultades, siendo los elevados costos y baja calidad del alimento balanceadouna de las principales. Según estudios realizados por el Ministerio de Agricultura, elalimento balanceado para los peces constituye un 67% de los costos en la cadena deproducción, debido en gran medida a que este alimento se fabrica a base de materiasprimas importadas. Los principales componentes del alimento balanceado son: torta desoya, salvado de trigo, almidón de yuca, harina de pescado y de carne, gluten de maíz,hemoglobina, vitaminas; en proporciones que varían según el precio de los insumos(Agrocadenas, 2005). No obstante, las dificultades mencionadas la cadena piscícola ha presentado grandesavances en competitividad y en Antioquia la piscicultura se estableció una de las líneasestratégicas en el plan de desarrollo Antioquia 2008-2011 (Gobernación de Antioquia,2008).

Microalgas en el tratamiento de aguas residuales: Estos organismos ofrecen soluciones a varios problemas ambientales, por ejemplo, enel tratamiento de aguas residuales de origen industrial, agrícola y doméstico, debido aque estos organismos promueven la remoción de nutrientes, contaminantes orgánicos einorgánicos y metales pesados. La alta concentración de nitrógeno inorgánico en losefluentes constituye un problema considerable para el tratamiento de aguas residuales,debido a los problemas de eutrofización que pueden causar. Frecuentemente lostratamientos primarios y secundarios no son efectivos para la remoción de compuestosde nitrógeno y fósforo. En este sentido para la remoción de dichos contaminantes esmás recomendable el uso de procesos biotecnológicos de que tratamientos terciariosquímicos (Vílchez, Garbayo, Lobato, & Vega, 1997). Microalgas en la producción de pigmentos: Las microalgas producen una serie de pigmentos que cumplen un papel importante ensu metabolismo fotosintético, y además tienen propiedades antioxidantes, dentro lasmicroalgas productoras de pigmentos se encuentra Haematococcus pluvialis la cual esuna microalga verde unicelular (Acosta, 2007) capaz de generar astaxantina (3,3’-dihydroxyB, B-carotene4,4“dione) en condiciones de estrés, éste es un derivado del B-caroteno y que es usado principalmente en las industrias avícola, acuícola, porcina,farmacéutica y alimenticia.

Microalgas en la producción de biocombustibles: Los cultivos de microalgas para la producción de biocombustibles con respecto a lasplantas oleaginosas pueden alcanzar una mayor eficiencia fotosintética, mejorasimilación de nutrientes, cortos periodos de producción sostenida durante todo el año,con rendimientos lipídicos por unidad de área considerablemente superior. Además, loscultivos microalgales son independientes de la estacionalidad y de la fertilidad del suelolo cual permite prescindir de herbicidas y pesticidas (Mata, Martins, & Caetano, 2010).Para su producción no son necesarios territorios aptos para la agricultura, la ganadería, Página 3 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024so a los recursos genéticos y sus productosel ampare de ia excepcionalidad establecida ena del expeciente RGE - 90418”. “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de ace:derivados, presentada por la Universidad de Medellin da:el artículo 6° de la Lev 1955 de 2019 de

la industria o el turismo, requieren menorestipo y calidad de ésta. dades de agua y son flexibles ante el Microalgas en la producción de pigmentos: Las microalgas producen una serie de pigmentos que cumplen un papel importante ensu metabolismo fotosintético, y además tienen propiedades antioxidantes, dentro lasmicroalgas productoras de pigmentos se encuentra Haematococcus pluvialis la cual esuna microalga verde unicelular (Acosta, 2007) capaz de generar astaxantina (3,3’-dihydroxyB, B-carotene4,4’-dione) en condiciones de estrés, éste es un derivado del B-caroteno y que es usado principalmente en las industrias avícola, acuícola, porcina,farmacéutica y alimenticia. Las microalgas generan metabólicamente unos subproductoslos cuales no hacen parte de sus componentes estructurales o de las vías metabólicasprincipales pero que son de gran valor para la industria, especialmente para lafarmacéutica y de alimentos presentes en fas comunidades de bosques tropicales. 1.2. Alcance del proyecto Bioprospección 1.3. Objetivo genera! Establecer un proceso investigativo pare la bioprospección. aistamiento y ia producciónde microalgas y coagulantes naturales, con aplicaciones en la alimentación piscícola, enel tratamiento de aguas residuales, en la producción de pigmentos y en la factibilidad dela producción de biocombustibles 1.4. Objetivos específicos

e Realizar un proceso de biopros; iy alsiamiento que permita la obtenciónde un cepario de microalgas con aplicaciones en la alimentación piscícola, enel tratamiento de agues residuales, en la producción de pigmentos y en laproducción de biocombustiblese Caracterizar cinéticamente el cultivo de las microalgas aisladas v establecerlas condiciones físicoquímicas, tales corno pH, medio de cultivo, agitación-aireación, suministro de CO2, entre otras que permitan la mayor producciónde biomasa microalgal. e Establecer metodologías aplicables ai cultivo de alevinos de peces medianteel uso de microalgas nativas de los géneros Chlorella, Scenedesmus,Desmodesmus y Ankistrodesmus para el aprovechamiento de áreasdegradadas por Minería (segunda fase). +. Evaluar el efecto de las microaigas aisladas en procesos terciarios detratamiento de aguas residuales (segunda fase). + Desarrollar un proceso de producción de pigmentos a partir de microalgasnativas (segunda fase). e Diagnosticar la factibilidad del uso de microalgas nativas para la producciónde biocombustibles (segunda fase). 1.5. Área de Aplicación Biotecnología, producción de sustancias de interés químico, farmacéutico e industrial. 1.6. Lista de referencia de los recursos biológicos a partir de los cuales seaccederá a los recursos genéticos Tabla 1. Listado del recurso biológico recolectado y accedido. Página 4 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024q

“Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos el artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”. NOMBRE NOMBRE oCIENTÍFICO ,. |VULGAR MUESTRAS Scenedesmus sp. Scenedesmus aDesmodesmus sp. Desmodesmus ifCoelastrum sp. Coelastrum lPediastrum sp. Pediastrum ylChlorella sp. Chlorella 1Ankistrodesmus sp. |Ankistrodesmus |1spirulina sp. Espirulina Tdiocystis sp. Radiocystis ElSynechococcus sp. Synechococcus |1Phormidium sp. Phormidium 1Pseudoanabaena sp. | Pseudoanabaena | 1 1.7. Responsable técnico Dra. Liliana Roció Botero Botero, identificada con cédula de ciudadanía No. 43.517.646 técnica del proyecto. 1.8. Proveedor del recurso biológico a partir del cual se accederá a losproductos derivados

Nombre o Razón Social: Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible.Documento de Identidad: 830115395-1Domicilio: CALLE 37 #8 - 40Teléfono: (57-1) 3323400Correo Electrónico: info@minambiente.gov.co.

1.9. Área Geográfica

La Universidad de Medellín presento una solicitud para amparar en el marco Artículo 6°de la Ley 1955 de 2019 la recolección de once (11) muestras de microrganismosfotosintéticos en 6 puntos localizados en el departamento de Antioquia (tabla 2). Tabla No. 2. Coordenadas de puntos de recolección.WGS 84 (4326Taxon sobre el Municipio : ( ) acual se accede Latitud (y) | Longitud (x)Scenedesmus sp. |Guatapé 6,2611111111|-75,1900000000Desmodesmus sp. |Guatapé | 6,2611111111 | -75,1900000000Coelastrum sp. Guatapé | 6,2611111111|-75,1900000000Pediastrum sp. Guatapé 6,2611111111 | -75,1900000000Chlorella sp. Guatapé |6,2611111111|-75,1900000000Ankistrodesmus GuafapéSp. 6,2611111111 | -75,1900000000Spirulina sp. Medellin 6,2708333333 | -75,5641666667Radiocystis sp. Caucasia | 7,9847222222 | -75,1980555556Synechococcus sp. Medellin 6,29351256 -75,50025963Phormidium sp. Medellin 6,29351256 -75,50025963épeudeane Deen Medellín |6,29351256 |-75,50025963 derivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en Página 5 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024IF UU 2 1 OCT 2024

derivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en Página 5 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024IF UU 2 1 OCT 2024 “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productosderivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”, De las once cepas de microrganismos aislados a partir de muestras de agua reportadospor la Universidad de Medellín una vez realizado el proceso de verificación decoordenadas se encuentra que fueron recolectadas en los municipios de Medellín,Caucasia y Guatapé en las jurisdicciones ambientales de la Corporación AutónomaRegional Del Centro de Antioquia (CORANTIOQUIA) Corporación Autónoma RegionalRionegro Nare (CORNARE) y Área metropolitana del Valle de Aburrá (AMVA) (Anexo 1,2y3). 1.10. Análisis de Especies Vedadas o Amenazadas El recurso biológico objeto de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivadoscorresponden a microorganismos, los cuales no se encuentran listados en algunacategoría de amenaza de la Resolución 0126 de 2024 y no presentan alguna veda orestricción nacional o regional, así como tampoco se encuentran listados en los apéndicesde la Convención sobre el Comercio Internacional de Especies Amenazadas de Fauna yFlora Silvestres (CITES).

1.11. Tipo de muestra Cepas de microorganismos fotosintéticos. 1.12. Lugar de procesamiento El lugar de procesamiento del material biológico se realizó en los laboratorios debiotecnología del grupo GRINBIO y el laboratorio de suelos ubicados en el Centro deLaboratorios de la Universidad de Medellín. Medellín carrera 87 No 30195, Coordenadas6%13'52.2"N 75%36'36.1"W 1.13. Tipo de actividad y uso que dará al recurso Con el proyecto de investigación, se pretende llevar a cabo la separación y purificaciónde una o más moléculas producto del metabolismo de microrganismos. 1.14. Metodología 1.14.1. Obtención de las muestras de agua para cada una de las áreas decolecta: Muestreo de microalgas para la toma de muestras se siguió la siguiente metodología: e Verificar que la red de plancton se encuentre desinfectada y estéril, con el fin de evitarel transporte y dispersión de individuos de especies invasoras en el cuerpo de aguadonde se va a tomar la muestra. e En caso de muestrear más de un cuerpo de agua el mismo día debe realizarse ladesinfección de la red de plancton, con una solución de hipoclorito de sodio a 100ppmdurante 1min y enjuagar con abundante agua destilada, antes de que vuelva a ser usada. e Antes de tomar la muestra en el envase respectivo, hay que lavarlo dos o tres vecescon la misma agua que va a ser tomada.

+ Planear la cantidad de muestras a tomar en cada punto para la preparación delmaterial. » Verificar que los equipos estén funcionando adecuadamente y tengan la bateríanecesaria para el trabajo en campo. Preparación del material Para la preparación del material se siguió la siguientemetodología: » Preparar una solución de hipoclorito de sodio a una concentración de 10% de cloroactivo, utilizando la siguiente formula. Página 6 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-202421 OCT 2024 “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productosderivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”. (Vol en litros) (concentración deseada en ppm)cc = (Concentración del producto en %) (100)= cc de hipoclorito de sodio Observaciones: En caso de no contarse con una red de plancton para realizar elmuestreo, se puede tomar la muestra directamente con el envase plástico de la zonafótica del cuerpo de agua, tomando una muestra discreta en los 25 a 30cm por debajode la superficie. Para obtener mezclas representativas es necesario hacer mezclas devarias tomas recogidas a lo largo de un determinado período de tiempo o en muchospuntos distintos de toma y obtener las muestras siempre a una profundidad no mayor a30cm de la superficie.

Registros de muestreo: Tanto en el rotulo del envase plástico como en la libreta decampo se debe llevar registro como mínimo de lo siguiente:

» Responsable del muestro.» Fecha de toma de muestra.e Identificación del lugar de muestreo.+ Número de la muestra. En la libreta de campo adicionalmente se debe llevar un registro de: ¢ Temperatura del agua in situ+ Temperatura del aire in situe Conductividade Transparencia+ pH del agua in situe pH del agua en laboratorioe Descripción del sitio+ Observaciones Tabla 3. Metodología por punto de recolección.Metodología para la obtención de la muestra y áreas deLugar colecta.Caucasia Toma directa desde el cuerpo de agua en los estanques depeces.Laguna Francisco | Se realizó un muestreo compuesto de diferentes sitios de laJosé de Caldas, Jardín | laguna usando para la colecta una red de plancton. LasBotánico Joaquín | muestras fueron mezcladas y transportadas en un recipienteAntonio Uribe de 1 litro.Se realizaron muestreos con red de Plancton en 12 diferentessitios de la represa incluyendo el centro: Superficie, SOL.Orilla: 1m de profundidad. Orilla: 1m de profundidad. SobreGuatapé las hojas: Muelle de la isla, 20L. Detrás de la isla, 40L. Aguacentro. Agua islotes. Centro lago. Muelle llegada. Cerca delmalecón. Lado de la represa. Las muestras se transportaronen recipientes de 300 mL,Piedras Blancas | Se tomaron 5 muestras superficiales de 300 mL en forma(Santa Elena) directa desde el cuerpo de agua.Se realizó un muestreo compuesto de diferentes sitios de larepresa usando para la colecta una red de plancton. Lasmuestras fueron mezcladas y transportadas en un recipientede 1 litro.Se realizó un muestreo compuesto de diferentes sitios de lalaguna usando para la colecta una red de placton. Lasmuestras fueron mezcladas y transportadas en un recipientede 1 litro. La Fé

La Fé Parque Norte 1.14.2. Transporte de muestras Página 7 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024YN | 2 1 OCT 2024 — “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de > a los recursos genéticos y sus productosderivados, presentada por la Universidad de Medellin bajo el amparo de la excepcionalidad estabiecida enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 90418”, Cada uno de los envases plásticos transparentes deben ser purgados con el agua delsitio de muestreo antes de ser utilizados. Las muestras deben ocupar tan solo 34 partesde la botella. Cuando el cuerpo de agua es muy poco profundo (menor a 5m) serecomienda tomar una muestra discreta directamente con el recipiente a 25 o 30 cm pordebajo de la superficie. Si se utiliza una red de plancton de 20um de poro, se realiza unarrastre horizontal durante 5 min para cada una de las muestras a tomar. En cada sitiode muestreo se deben tomar los datos de temperatura del agua, temperatura del aire,pH del agua, conductividad del agua, transpare y hacer la descripción del sitio. Todaslas muestras se almacenaron en recipientes de vidrio y fueron transportadas en neverasde icopor provistas de hielo para evitar cambios en la comunidad nativa. 1.14.3. Cultivo y aislamiento de microalgas

El procesamiento de todas las muestras colectadas se dividió en dos etapas una fase 1en la que se realizó el establecimiento de cultivos mixtos y una fase II de aislamiento demicroalgas buscando obtener cultivos monoespecíficos.

Fase I: establecimiento El material que se recolecta de campo se pasa a una fase deestablecimiento, en la cual se pretende aumentar la biomasa microalgal, para esto seinicia con la toma de pH de la muestra inicial y hace una dilución inicial de la muestrade 1:10 en un medio de cultivo especifico CHUI3 (ver Tabla 4).

Adicionalmente se evalúa la respuesta a la aireaci Tabla 4. Componentes e indicaciones p ración del medio CHU13.¡Para¡prepararStock | Sustancia Concentración(9/1) 50m de | Indicacionesstockagregar Disolver el FeSOs.7H20 en 20ml deagua estilada,aparte disolver elNa2EDTA en 20ml de 1 FeSO. 7H20 7,510-3 | 0,3705g agua destilada. |¡ | Mezclar las |: solucionesanteriores ycompletar elvolumen. RegularpH 4.Si no es posiblepesar con exactitudlas cantidades máspequeñas se puedeH3BO3 2,85910-3 0,143g pesar 10 veces lacantidad, disolverlaen 10m! y tomar im!parapreparar el Stock.NaMoOs. 2H20 0,05 10-3 0,00259 2 CoClz. 6H20. 0,081 10-3 0,0041g

Mn Cle 1,14610-3 9,05739se reemplaza porMnSOs ¡200879CuCl2, 2H20 0,054 10-3 | 0,9027gse reemplaza por | ;CuSOs.5H20 | 20032949 Página 8 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-202421 00T 2024 — “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productosderivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”. ParaprepararStock | Sustancia Concentración(g/L) | 50ml de | IndicacionesstockagregarZnSOs 0,123410-3 0,0062g K2HPOs [0,04 2g3 Se reemplaza porKH2PO4 1,562621939 4,1 MgSOz. 7H20 0,1 2,5 4,2 CaCl2.2H20 0,08 2 4,3 KNO3 0,2 5 La fase de establecimiento dura aproximadamente 15 días, después de los cuales seinicia la observación microscópica de los cultivos mixtos. 1.14.3.1 Variaciones de nitrógeno y fosforo en el medio CHU13. Con el objetivo de observar la selectividad del medio de cultivo se realizan variacionesen la concentración de fosforo y nitrógeno adicionado (stock 3 y 4.3), dejando constanteel resto de los componentes. En cada uno de los nuevos medios se hizo el pase de lamuestra que estaba en establecimiento y se realizaron diluciones hasta 10-3, ésta últimadilución fue observada al microscopio después de 15 días.

Una vez culminado el rastrec microscópico se procede a implementar métodos deaislamiento con el fin de obtener cultivos monoespecíficos. Primero se aplica la técnicade diluciones seriadas para favorecer las especies más abundantes en la muestra, setoma entonces 1mL de la muestra y se lleva a 9mL de medio, de éste se toma 1mL y selleva a otros 9mL y así sucesivamente hasta alcanzar la dilución deseada la cual seestima según los resultados obtenidos en constantes observaciones al microscopio ygeneralmente va de 10-3 a 10-5, es importante tener en cuenta que las diluciones serealizan para cada una de las variaciones del medio CHU13 (tabla 2.).Después deobtener cultivos más específicos en cuanto a especies, se seleccionan y se pasan asegunda fase. Para tener una medida cuantitativa de la biomasa producida en la fase deestablecimiento se determina el peso seco de las muestras, donde la biomasa se expresaen g/L.

1.14.3.2 Fase II: aislamiento Metodología 1. De la mayor dilución se seleccionan aquellas muestras en las que se tienemenor cantidad de especies o las que tengan especies con potencial biotecnológico, aéstas se les prueba la respuesta de selección en el medio estándar CHU13 (Tabla),3N-BBM+V y adicionalmente se evalúa la adición de una fuente de carbono (0,4g/LBicarbonato de Sodio). Se toma entonces 0,3mL de muestra y se lleva a 2,7mL de medioy se somete a luz constante. Después de 15 días se inicia la observación microscópicapara evaluar el nivel de aislamiento y seleccionar los cultivos monoespecíficos o reiniciarel proceso de aislamiento.Metodología 2. Otro método empleado es el uso de diluciones seriadas (10-3 a 10-5) decultivos mixtos con la posterior siembra en placa de las ultimas diluciones, esta formade aislamiento se realiza por siembra en estría en medio semisólido (medios usados encultivo liquido + 0,5% a 1% de agar); es útil en la purificación del cultivo especialmentesi las especies de interés no son móviles.

1.14.4Evaluación del potencial de las microalgas para la remoción de cadmiode aguas contaminadas Microorganismos: Se utilizaron tres cepas de microalgas de los géneros Chlorella, Scenedesmus yAnkistrodesmus (Figura 4) aisladas de ambientes nativos por el grupo GRINBIO de laUniversidad de Medellín, la identificación de las cepas fue realizada mediante clavestaxonémicas. Medio de cultivo Tanto para los ensayos de determinación de cinéticas decrecimiento como los ensayos de tolerancia y de eliminación del Cd, las microalgas de tdSNPágina 9 de 25F-M-INA-46:V4 21-08-2024'4 “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productosderivados, presentada por la Universidad de Medellín bajo el amparo de la excepcionalidad establecida enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019 dentro del expediente RGE - 00418”. estudio se cultivaron en el medio 3N+V BBM (Bold Basai Medium) (Castañeda Briones,2004). Los ensayos se realizaron en matraces Erlenmeyer de 250 mL con volumen de trabajode 150 mL en donde el 10% corresponde al inóculo de cada especie de microalgas. Todoslos ensayos se mantuvieron en condiciones controladas de laboratorio a 22+2C coniluminación constante con lámparas de luz blanca fluorescente de 17 W y bajo agitaciónconstante en un agitador orbital a 100 rpm.

1.14.5Determinación de la cinética de crecimiento: Para determinar las cinéticas de crecimiento de las microalgas de estudio, los ensayosse realizaron en matraces Erlenmeyer de 250 m£ con volumen de trabajo de 150 mL demedio 3N+V BBM (descrito en el numeral 5.1.1) en donde el 10% corresponde al inóculode cada especie de microalgas el cual fue preparado usando DESCRIBE COMO LOPREPARASTE. Con el fin de determinar la cinética de crecimiento, las tres microalgasfueron cultivadas durante 15 días en condiciones controladas de laboratorio a 22+ 2Ccon iluminación constante con lámparas de luz blanca fluorescente de 17 W y bajoagitación horizontal constante en un agitador orbital a 100 rpm. Para determinar las cinéticas de crecimiento, cada 24 horas se tomaron muestra de 10HL de cada Erlenmeyer. El crecimiento se determinó mediante conteo celular con cámarade Neubauer (según metodología descrita previamente). También se determinaronparámetros de crecimiento como velocidad específica de crecimiento (según metodologíadescrita previamente), densidad celular máxima (según metodología descritapreviamente) y tiempo de duplicación (según metodología descrita previamente). F