MINAMBIENTE - Resolucion 934 de 2025

COLOMBIA

POTENCIA DE LA

AC VIDA MINISTERIO DE AMBIENTE Y DESARROLLO SOSTENIBLE “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo lo dispuesto en el artículo 6% de la Ley 1955 de 2019” LA DIRECTORA DE BOSQUES, BIODIVERSIDAD Y SERVICIOS ECOSISTEMICOS En ejercicio de sus facultades legales y especialmente las conferidas en el numeral 14, del artículo 16 del Decreto Ley 3570 de 2011 y la Resolución 1756 de 2022, y CONSIDERANDO ANTECEDENTES Que mediante comunicación con radicado” No. 11446 del 9 de abril de 2021, el Vicerrector de Investigación y Extensión de la Universidad Francisco de’ Paula Santander presentó a la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos de este Ministerio la solicitud de Contrato de Acceso a los Recursos Genéticos y sus Productos Derivados con el fin de autorizar las actividades de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados realizadas en desarrollo del proyecto de investigación denominado: "Potencial biofertilizante, biocontrolador y antagonista de aislados nativos de suelos agrícolas en Norte de Santander” bajo el amparo de lo estipulado en el artículo 6% de lá Ley 1955 de 2019. Que mediante comunicación con radicado No. 2103-2-1579 del 7 de julio de 2021, la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible requirió a la Universidad Francisco de Paula Santander aportar información adicional a la solicitud de contrato para el proyecto

Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible requirió a la Universidad Francisco de Paula Santander aportar información adicional a la solicitud de contrato para el proyecto titulado: “Potencial biofertilizante, biocontrolador y antagonista de aislados nativos de suelos agrícolas en Norte de Santander”. — Que mediante comunicación con radicado No. El-2021-35246 del 7 de octubre de 2021, la Universidad Francisco de Paula Santander remitió al Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible las respuestas a los requerimientos realizados mediante radicado No. 2103-2-1579 del 7 de julio de 2021. | Que la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible mediante Auto No. 278 del 9 de noviembre de 2021 admitió la solicitud de Contrato de Acceso a los Recursos Genéticos y sus Productos Derivados bajo lo establecido en el Artículo 6° de la Ley 1955 de 2019, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander para autorizar las actividades de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados reálizadas en desarrollo de C F-M-INA-46: V2 - 25/05/2023 y Página 1 | 28é COLOMBIA “VIDA O “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula santander Pajo el pro de la excepcionalidad stable €l rtículo 6° de la e y 1 955 de a : proyecto de investigacion denominado: Potencial biofertilizante, biocontrolador y antagonista de aislados nativos de suelos see en Norte de Santander”. a

y 1 955 de a : proyecto de investigacion denominado: Potencial biofertilizante, biocontrolador y antagonista de aislados nativos de suelos see en Norte de Santander”. a Que de igual forma, el acto administrativo referido ordeno: a la Universidad Francis de Paula Santander realizar una. publicación. del extracto de la solicitud en un medic de comunicación dentro de los cinco O días habiles o a la notificación del Auto. | . _ : oa aa Que mediante radicado No. 40720 del 18 de no iernbre niversidadFrancisco de Paula Santander remitió la publicación del Auto No. 2/8 del 9 de noviembre de 2021, del proyecto denominado: Potencial biofertilizante, biocontrolador y a | de asados nativos de Les eo en Norte de : Santander”. . . . . o IU : Que mediante comunicación con fadicado No. 2103-E2-2022-02132 del 25 de abril de __ 2022, la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible requirió a | iver _ Fra a a Santander aclarar el área de recolecci el. te biofertilizante, biocontrolador y antagonista de aislados nativos de suelos agricola las El Norte de Santander”. o Que mediante comunicación con:radicado No. 2022E1022622 del 01 de julio de 2022, o la Universidad Francisco de Paula Santander remitió al Ministerio de Ambiente y No. 2103-E2-2022-02132 del 25 de abril de 2022. Que! ae comunicacion con radicado! No. 2103202 de Ae y | Desarrollo sostenible reg Santander ampliar información de las actividac

No. 2103-E2-2022-02132 del 25 de abril de 2022. Que! ae comunicacion con radicado! No. 2103202 de Ae y | Desarrollo sostenible reg Santander ampliar información de las actividac “Potencial biofertilizante, biocontrolador y antagor agrícolas en Norte de Santander”. o Que mediante comunicación. con radicado No. | la Universidad Francisco de Paula Santander rer Desarrollo Sostenible las respuestas a los requerimient - No. 2103-E2-202202132 del 25 de abril de 2022. _ proyectos elontilos por da Universidad ene de 2019. : _ Que mediante comunicación con radicado N 2 03202 de 2022, la Dirección de Bosques, Biodiversi _ Ministerio de Ambiente y Desarrollo Soste de Paula Santander la fecha de la reunion, 2022 de manera virtual por la Plataforma ge los requerimientos. o Que mediante comunicación con radicado No 2022 la Universidad Francisco de Paula Sant _ Desarrollo Sostenible una prórroga para reCOLOMBIA _ POTENCIA DE LA® Rie te ‘ Ambiente “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6° de la Ley 1955 de 2019” Que mediante comunicación con radicado No. 21032022E2023348 del 22 de diciembre de 2022, la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible otorgó un plazo para la entrega de la

de 2022, la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible otorgó un plazo para la entrega de la información requerida hasta el 28 de febrero de 2923 para entregar la información solicitada. Que mediante comunicación con radicado No. 2023E1007903 del 28 de febrero de 2023, la Universidad Francisco de Paula Santander solicitó una segunda prórroga para responder los requerimientos realizados. Que mediante comunicación con radicado No. 21032023E2006478 del 10 de marzo de 2023, la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos del Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible otorgó a la Universidad Francisco de Paula Santander un segundo plazo para la entrega de la información requerida hasta el 20 de abril de 2023 para entregar la información solicitada, y recomienda se adelante respuesta a los requerimientos que no dependen del Ministerio del interior, Que mediante comunicación con rádicado No. 2023E1017867 del 25 de abril de 2023, la Universidad Francisco de Paula Santander remitió al Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible lás respuestas parciales sin el certificado del Ministerio del Interior. Sin embargo, posteriormente, mediante comunicación con radicado No. 20231041777 del 11 de septiembre de 2023, la Universidad allegó el certificado del Ministerio de Interior. . Que mediante comunicación con radicado No. 2024E1004467 del 31 de enero de 2024, la Universidad Francisco de Paula Santander remitió documentación relacionada con respecto la nueva representante legal de la Universidad y sus respectivos soportes. Que en cumplimiento de lo previsto en el artículo 29 de la Decisión Andina 391 de

la Universidad Francisco de Paula Santander remitió documentación relacionada con respecto la nueva representante legal de la Universidad y sus respectivos soportes. Que en cumplimiento de lo previsto en el artículo 29 de la Decisión Andina 391 de 1996 de la Comisión del Acuerdo de Cartagena y. las competencias asignadas por el Decreto 3570 de 2011 a la Dirección de Bosques, Biodiversidad y Servicios Ecosistémicos, se emitió Dictamen Técnico Legal No. 354 del 17 de junio de 2024, mediante el cual se tuvieron en cuenta las siguientes consideraciones: E)

1. ANÁLISIS DE LOS ASPECTOS TÉCNICOS DE LA SOLICITUD DE ACCESO 1.1. Justificación Las bacterias diazótrofas pueden estimular el crecimiento de los cultivos mediante diversos procesos como la síntesis de hormonas, fijación de nitrógeno y producción de Sideróforos entre otros. El conocimiento de bacterias diazotróficas predominantes en los agroecosistemas permitiría establecer su uso eficiente como potenciales biofertilizante, biocontrolador y antagonista.

La fijación biológica de Nitrógeno, constituye el mayor aporte biológico de nitrógeno a la biosfera, es vista como una fuente esencial y potencial para el desarrollo de agro sistemas sustentables (Pedraza R.O, et al., 2010) ,es por esto que la evaluación del potencial como promotores de crecimiento vegetal de los microorganismos que habitan el suelo se convierte en una alternativa viable que permite la recopilación de información y la futura formulación de biofertilizantes que ayuden a disminuir la F-M-INA-46: V2 - 25/05/2023

habitan el suelo se convierte en una alternativa viable que permite la recopilación de información y la futura formulación de biofertilizantes que ayuden a disminuir la F-M-INA-46: V2 - 25/05/2023 Página 3 | 28COLOMBIA fe © POTENCIADELA | | VIDA “Por la cual se acepta une solicitud de contrato de acceso a os recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad. Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6° de la Ley 1955 de 2019" : Ambiente fertilización química y. restaurar: en alguna medida las caracteristicas naturales de los . suelos dedicados a lá nto: o o Es importante conocer. el número. y las especies de. bacterias dazotrstices : predominantes en los agroecosistemas especialmente en los sistemas de producción caracterizados por la aplicación de agroquímicos sintéticos y definir su eficiencia como Biofertilizante potenciales para aumentar las alternativas en el desarrollo de una “agricultura sustentable y con producción a bajo costo. (Alfonso et al., 2005) El interés de este proyecto será conocer las principales bacterias diazótrofas rizosféricas y endófitas en cultivos de interés en la mayor zona de producción. del departamento Norte de Santander. a 1.2. Alcance del proyecto _Bioprospeccion sin fines comerciales... 1.3. Objetivo general Evaluar el potencial Biofertilizante de aislados n nativos de suelos agrícolas en Norte de Santander. : : o 1.4. Objetivos específicos 1.4.1. Aislar microorganismos con potencial Borie d partir. de suelos agricolas.

Santander. : : o 1.4. Objetivos específicos 1.4.1. Aislar microorganismos con potencial Borie d partir. de suelos agricolas. 1.4.2. Caracterizar fenotípica bioquímica Y molecularmente los microorganismos aislados. : : 1.4.3, Realización de pruebas fisiológicas Para la producción de ácido. indolacético AIA, Fosforo y Sideróforos. : 1.4.4. Producción de inoculantes microbianos pe el desarrollo de plantas « e A. etapa de vivero. o 1.5. Área de aplicación Ciencias Básicas y microbiología: agrícola. 1.6. Lista de Referencia de los Recursos Biológicos objeto del proyecto. “ Articulo 6° de la Ley 1955 de 2019. : Tabla 1. Lista de Referencia de Jos Recursos Biológicos informados en la solicitud de Acceso a los Recursos Genéticos y sus Productos Derivados. : Cantidad de aislamientos Tipo de muestra. Microorganismo Aeromonas hydrophila . 1. A Suelo Rizosférico Azospirillum brasilensis 6 “Suelo eo Azospirillum sp. a 4 : Rizósfera | Azotobacter chrococcum | 5 Rizósfera — -E-M-INA-46: V2 - 25/05/2023 Página 4 | 28COLOMBIA POTENCIA DE LA VIDA | “Por la cual se acepta una solicitud. de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6 de la Ley 1955 de 2019”

Ambiente

y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6 de la Ley 1955 de 2019” Ambiente Azotobacter nigricans 3 Material vegetal , Lycopersicon esculentum Azotobacter sp. 6 Suelo agricola Azotobacter vinelandii 3 Suelo agricola Bacillus sp. 2 Suelo agricola Bacillus thuringiensis ; 3 Suelo agricola Burkholderia ambifaria _ 1 Rizósfera Burkholderia cepacia 8 Suelo agricola Burkholderia glumae 8 Suelo agricola Burkholderia sp. 5 Suelo agricola Enterobacter cloacae 1 ‘| Suelo agrícola Enterobacter sakazakii 1 Suelo agrícola Gluconacetobacter 1 Suelo agrícola azotocaptans Gluconacetobacter 1 Rizósfera johannae Gluconacetobacter sp. A Rizósfera Herbaspirillum sp. 2 Rizósfera Klebsiella neumonía 4 Suelo Rizosférico Klebsiella oxytoca 2 Suelo Rizosférico Pseudomonas 1 Suelo Rizosférico fluorescens Pseudomonas putida 3 Suelo agrícola Pseudomonas Sp. 5 Suelo agrícola Serratia fonticula . 2 Suelo Rizosférico Stenotrophornonas 1 Suelo agricola maltophilia : Asi mismo el Recurso Biológico listado en la Tabla 2 corresponde también para las

Serratia fonticula . 2 Suelo Rizosférico Stenotrophornonas 1 Suelo agricola maltophilia : Asi mismo el Recurso Biológico listado en la Tabla 2 corresponde también para las actividades pendientes de recolección en el cual la Universidad pretende realizar nuevos aislamientos de bacterias a partir de muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de diferentes cultivos de la región en Norte de Santander. 1.7, Responsable técnico Laura Yolima Moreno Rozo, 1.8. Proveedor del recurso biológico Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible en el caso de fos microorganismos. ' + : » Productores agrícolas de Norte de Santander para las muestras de origen agrícola. o F-M-INA-46: V2 - 25/05/2023 Página 5 | 28“Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6° de la Ley 1955 de 2019" 1:9. Area geográfica La Universidad: Francisco de Paula Santander presentó una solicitud bajo las disposiciones del artículo 6° de:la Ley 1955 de 2019, donde se informa que ta procedencia del recurso biológico de 83 cepas de bacterias pertenecientes a / géneros — y 19 especies las cuales fueron aisladas a partir de muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de diferentes cultivos localizados en el departamento de Norte de Santander; así mismo, se pretende seguir aislando muestras de bacterias

y 19 especies las cuales fueron aisladas a partir de muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de diferentes cultivos localizados en el departamento de Norte de Santander; así mismo, se pretende seguir aislando muestras de bacterias asociadas a suelos agrícolas, material foliar, raices y tallos de diferentes cultivos localizados en el departamento de Norte de Santander. o : 1.9.1. Actividades de recolección informadas por la Universidad Francisco | de Paula Santander en consideracion al articulo 6° de la Ley 1955 de

2019. .

Así. mismo, en la solicitud de Contrato de Acceso a los Recursos Genéticos y sus Productos Derivados bajo las disposiciones del Artículo 69 de la Ley 1955 de 2019, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander se informa la procedencia de recolección de material biológico correspondientes a 83 cepas de bacterias pertenecientes a / géneros y 19 especies de bacterias procedentes en muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces Y tallos de diferentes cultivos del departamento de Norte de Santander, adicionalmente se reporta que iniciaron actividades de recolección desde el año 2011 (Tabla E o Tabla 2. Puntos de recolección de procedencia del y recurso biológico muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de dif rentes cultivos del departamento de Norte de Santander. . ‘Sistema de Referencia Faxon Municipio |. WES Ba (Código - EPSG 4926) ido | img Aéromonas hydrophila Chinácota E 7,549357338843. 72 585554122921 ‘Azdspitilfuny’ brasilensis Chinscota || 7,523402934424 : -72,867805738202

ido | img Aéromonas hydrophila Chinácota E 7,549357338843. 72 585554122921 ‘Azdspitilfuny’ brasilensis Chinscota || 7,523402934424 : -72,867805738202 ‘Azospirillum Sp. Zulia Ae 8,130948900752 :72,612/62451172 ‘Azotobacter chrococcum Chinácota | 7525002030424 a sereos 738202 . Azotobacter nigricans = Chingcota, | 7,523402934424 | -72,/567805738202. Lo Azotobácter:sp: z Chinácota : 7/523402934424. ..572,56/809/38202 ‘Azotobacter vinelendil Chinácota | 7,523402934424 -72,56/805738202 Bacillus sp. Ehimácota | 7/538500735779 | Si sesarsave3ea Bacillus thuringiensis Los patiós: | 7,834642823730 | -72/480076354994 | Burkholderia arbifaria Chiriacota 1:57/523402934424 =72,567805/38202 Burkholderia cepacia Chindcota’ | 7540357338643 | 70 sesssai22001 | a Burkholderia glumas so] Chindéota | || 7523402934424 | -72,567805/38202

Burkholderia Sp: Chinácota | 7,523402934424 72,50 7905738200 da Enterobacter cloacae : Chinacota 7549357338843 /2/585554122921: Enterobacter sakazakii 0 Chinácote | 7549357338843 2 Sessa 122921

Gluconacetobacter azotócaptans: Chinácota 10 7523402934424 : -72,567805738202

Enterobacter sakazakii 0 Chinácote | 7549357338843 2 Sessa 122921

Gluconacetobacter azotócaptans: Chinácota 10 7523402934424 : -72,567805738202

Gluconacetobacter johannaé | Chindcota 7,523402934424 -72,567805738202

EM INA: 46: V2> 35/0 pagina 6 | 28G POTENCIA DELA “ VIDA “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6° de la Ley 1955 de 2019” Gluconacetobacter sp. Zulia 8,130948900752 -72,612762451172

Herbaspirillum sp. Zulia 8,130948900752 -72,612762451172 Klebsiella neumonía . Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 Klebsiella oxytoca Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 Pseudomonas fluorescens Chinácota + 7,549357338843 . 772,585554122921 Pseudomonas putida Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 Pseudomonas Sp. Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 Serratia fonticula. Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 Stenotrophomonas maltophilia Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 punto de recolección reportado como Villa del Rosario los patios al realizar la verificación de coordenadas se evidencia que la coordenada corresponde a Los Patios. .

Stenotrophomonas maltophilia Chinácota 7,549357338843 -72,585554122921 punto de recolección reportado como Villa del Rosario los patios al realizar la verificación de coordenadas se evidencia que la coordenada corresponde a Los Patios. . De las 83 cepas de bacterias aisladas a partir de muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos, en los 23 registros reportados por la Universidad Francisco de Paula Santander una vez realizado el proceso de verificación de coordenadas se encuentra que las muestras provienen de los municipios de Los Patios, Del Zulia y Chinácota, en la Jurisdicción ambiental de la Corporación Autónoma Regional de la Frontera Norcriental CORPONOR (Anexo 1, 2 y 3). 1.9.2. Actividades de recolección pendientes por realizar. Teniendo en cuenta que la Universidad manifiesta que, a partir de muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de diferentes cultivos de la región en Norte de Santander se realizarán aislamientos de los microorganismos objeto del acceso, y entendiendo que la recolección de estos se entiende como el aislamiento de estos en el laboratorio, .este Ministerio solo autorizará el aislamiento de microorganismos procedentes de muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de diferentes cultivos de la región en Norte de Santander ubicados en los municipios de Los Patios, Del Zulia y Chinácota. Para el caso de las muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos del departamento de Norte de Santander, la Universidad deberá remitir copia de los contratos accesorios que en este caso en particular corresponderán a los

Para el caso de las muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos del departamento de Norte de Santander, la Universidad deberá remitir copia de los contratos accesorios que en este caso en particular corresponderán a los documentos que permitan evidenciar la donación o compra de las muestras de suelo agrícola. 1.10. Análisis de especies vedadas o amenazadas Los recursos biológicos que serán objeto de acceso a recursos genéticos y sus productos derivados corresponden a microorganismos, los cuales no se encuentran listados en alguna categoría de amenaza de la Resolución 0126 de 2024, no presentan alguna veda o restricción nacional o regional, así como tampoco se encuentran listados en los apéndices de la Convención sobre el.Comercio Internacional de Especies Amenazadas de Fauna y Flora Silvestres. . 1.11. Tipo de muestra Microorganismos asociados 4 muestras de suelos agrícolas, material foliar, raíces y tallos de diferentes cultivos de la región en Norte de Santander.

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Página 7 | 28; A TOA “Por. la al se acepta una solicitud. de contrato de acceso a jos recursos genéticos y.sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida e enel artículo 6° de la Ley 1955 de 2019" : Ambiente 1.12. Lugar de procesamiento Las muestras fueron y. se protesaran en el Laboratorio de Investigaciones en Microbiología Avanzada, Universidad Francisco de Paula Santander, Coordenadas geográficas latitud 7°53'53,000016" N. y longitud 720291 a a W.

Las muestras fueron y. se protesaran en el Laboratorio de Investigaciones en Microbiología Avanzada, Universidad Francisco de Paula Santander, Coordenadas geográficas latitud 7°53'53,000016" N. y longitud 720291 a a W. 1.13. Tipo de actividad. y uso que dará al recurso e Actividades de investigación científica. Bioprospección, de la biodiversidad microbiana asociada a suelos de cultivos para identificar y obtener nuevas fuentes de inoculantes microbianos a escala de laboratorio y aplicación en campo de microorganismos con _ potencial biofertilizante y biocontrolador, así mismo, el aislamiento producción de metabolites microbianos a escala de laboratorio. : 1.14. Metodología 1.14.1. Metodología de muestreo en campo Se toman muestras de suelo, material foliar, raíces y tallos ae diferentes cultivos - de la región, en etapa joven, los cuales son recolectados en sobres de papel hasta uso en el laboratorio. En el caso de la muestra de suelo, se toman submuestras de la zona rizosférico, a 10 an de profundidad. : : La muestra de suelo-es homogenizada en el laboratorio, de los cuales se toman 10 gr y se adicionan en una solución diluyente, para realizar diluciones seriadas y posteriormente realizar la siembra en medios solidos selectivos de acuerdo. con e/ género de interés. El material foliar, las raíces y los tallos son “macerados Para juegs pesar 10 gramos de cada muestra y realizar las diluciones seriadas y posteriormente realizar la siembra en medios solidos selectivos de acuerdo con el género de Interés. : 1.14.2. Cuantificación mediante la técnica del Número Más Probable. :

de cada muestra y realizar las diluciones seriadas y posteriormente realizar la siembra en medios solidos selectivos de acuerdo con el género de Interés. : 1.14.2. Cuantificación mediante la técnica del Número Más Probable. : Las bacterias -diazotroficas encontradas en su hábitat principal son aisladas mediante la técnica del NMP a partir de diferentes muestras de suelo. Se realizan diluciones seriadas de suelo hasta 10-7 y se siembran en los medios ser ¡sólidos NFb (Azospirillum sp.), JNFb (Herbaspirillum sp.), LGI (Gluconacetobacter sp.) y JMV (Burkholderia sp.). Los inoculados se incuban durante 8 dias a 32°C. La ae --e interpretación de resultados se realiza mediante la tabla de Mc Craddy (Débereiner et al., 1995). : L 14. 3. Aislamiento de microorganismos. El aislamiento de cultivos puros depende de los resultados obtenidos en el recuento de NMP para los cuatro medios selectivos semisólidos y libres de nitróg o evaluados NFb (Azotobacter sp., Azospirillum sp.), INFD (Herbaspirillum sp.), LGI (Gluconacetobacter sp.) y JMV (Burkhloderia sp.). KING B (Pseudomonas sp.) Además, es necesario el uso de claves para el aislamiento. Se realiza siembra directa en cada uno de los medios selectivos sólidos correspondientes esperando obtener de esta forma colonias aisladas bajo Jas mismas condiciones de crecimiento en los diferentes medios selectivos y a partir de las mismas llegar a un cultivo puro empleando el método de siembra por francés o estría gleties al a de la muestra que permite el crecimiento de colonias aisladas. o F-M-INA-46: V2 = 25/05/2023 —

empleando el método de siembra por francés o estría gleties al a de la muestra que permite el crecimiento de colonias aisladas. o F-M-INA-46: V2 = 25/05/2023 — Pagina 8. | 28COLOMBIA - POTENCIA DE LA © VIDA. “Por la cual se acepta una solicitud de contrato de acceso a los recursos genéticos y sus productos derivados, presentada por la Universidad Francisco de Paula Santander bajo el amparo de la excepcionalidad establecida en el artículo 6° de la Ley 1955 de 2019” mbiente 1.14.4. Método rápido de identificación bacteriana métodos rápidos. Los aislados obtenidos se siembran por duplicado en placas de agar nutritivo mediante el método de estría e incubados a 35 + 2 °C de 24 a 48 h. Después del tiempo de incubación se realiza la lectura de la prueba mediante el uso de una tabla de colores que permite dar una puntuación a cada prueba y este un código a cada aislado. Los resultados se determinan por el viraje del color de los pozos, como lo índica la tabla de lectura del kit de identificación. 1.14.5. Caracterización Fisiológica de los aislados. 1.14.5,1. Determinación de AIA. Microorganismos capaces de metabolizar el Ácido Indo! Acético, determinación de la producción de compuestos indólicos. Para cada uno de los aislados se toman colonias jóvenes y se inoculan en 50 mL de caldo DYGS al 2%, los caldos se llevan a incubación durante 3 días a 32° C y 120 rpm. La biomasa obtenida se centrifuga a 8000 rpm durante .10 minutos. Las células se suspenden en 10 mL de buffer

a incubación durante 3 días a 32° C y 120 rpm. La biomasa obtenida se centrifuga a 8000 rpm durante .10 minutos. Las células se suspenden en 10 mL de buffer fosfato estéril 0,06 M y pH 7,0; ajustar la densidad óptica a 0,5 unidades de absorbancia que corresponden a un recuento de 10 8.UFC/mL usando una longitud de onda de 605 nm en espectrofotómetro. De esta suspensión celular se toman 100 UL y se inocularan por triplicado en 25 mL de caldo DYGS con precursor del ácido indol acético y fuente de nitrógeno. Sé incuban en oscuridad y agitación de 120 rpm. Después de 48 h de incubación, se centrifugan 10 mL del caldo microbiano a 8000 rpm durante 10 minutos; Se toman 2 mL del sobrenadante y se adicionaron 8 mL de reactivo de Salkowsky hasta que se obtiene una coloración rosada que evidencia la presencia de compuestos Indólicos totales, Se realiza la lectura de la absorbancia de las muestras a una longitud de onda de 535 nm. La concentración de compuestos indólicos se calcula utilizando la ecuación de regresión lineal de la curva de calibración construida a partir de diferentes concentraciones de ácido indolacético, AIA con la adición del reactivo de Salkowsky y leídas a 535 nm. 1.14.5.2. Determinación de solubilización de fosfatos. Índice de solubilización de Fósforo a nivel cualitativo y cuantitativo por. los microorganismos aislados. Para cada uno se toman colonias jóvenes y se inoculan en 50 mL de caldo DYGS al 2% y se llevan a incubación durante 5 días a 329 Cy

microorganismos aislados. Para cada uno se toman colonias jóvenes y se inoculan en 50 mL de caldo DYGS al 2% y se llevan a incubación durante 5 días a 329 Cy 120 rpm. La biomasa obtenida se centrifuga a 8000 rpm durante 10. El sobrenadante se descarta y las células se suspenden en 25mL de buffer fosfato estéril 0,06 M y pH 7,0; el procedimiento se repite hasta que la densidad óptica se ajusta a 0,5 unidades de absorbancia que corresponden a un recuento de 10 8 UFC/mL usando una longitud de.onda de 605 nm. De esta suspensión celular se toman 100uL y se inoculan en caldo con fosfato tricálcico, sin indicador de pH. Los cultivos se incuban a 32°C, con agitación continua a 120 rpm. Se realiza un control por triplicado sin inocular y se incuba bajo las mismas condiciones. La lectura de la concentración de Fósforo disponible se realiza por el método de Bray II, ajustado para muestras de caldos microbianos. Luego de la etapa de incubación se centrifuga 10 mL del cultivo microbiano a '6000 rpm durante 10 minutos. Se toma el sobrenadante y se adiciona 10 mL de la solución extractora y se agita durante 1 mínuto. Luego, se toma un 1 mL de está solución y se le adiciona 9 mL de la solución coloreadora, se deja reaccionar durante 15 minutos y se lee a una longitud de onda de 880 nm. La concentración de Fósforo disponible (ug/mL de P205) que indica la capacidad de solubilización de fosfatos, se calcula utilizando la ecuación de AS

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de 880 nm. La concentración de Fósforo disponible (ug/mL de P205) que indica la capacidad de solubilización de fosfatos, se calcula utilizando la ecuación de AS

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